Estandarización del método de la “bolsa de aire” para su utilización en la evaluación in vivo de sustancias con actividad leishmanicida

Abstract

La evaluación de sustancias con actividad Leishmanicida in vivo, actualmente se realiza en modelos animales (ratones o hámster), previo aislamiento y cultivo de los parásitos de Leishmania ssp. y su posterior inoculación y producción de infección en el animal. En este estudio se adaptó la técnica de «Bolsa de aire» descrita por Edwars y colaboradores en 1981, inoculando promastigotes de Leishmania Viannia panamensis (cepa MHOM/CO/87/UA140) vía subcutánea en el espacio interescapular en hámster dorados (Mesocricetus auratus) machos, con el fin de estandarizar un método adecuado para la evaluación in vivo de la actividad leishmanicida de sustancias de origen natural, sintético o hemisintético. En los días 30, 60 y 90 post-inoculación, a cada reactivo biológico se le realizó frotis y aspirado para cultivo en medio NNN para determinar la presencia de infección; en el día 90 a los animales se les aplico la eutanasia, y se tomaron biopsias del sitio de inoculación. Las muestras se procesaron y colorearon con los métodos de Hematoxilina - Eosina y Giemsa. Los aspectos éticos relacionados con el manejo y cuidado de los hámster contaron con la aprobación del ”Comité de Ética de Animales de Experimentación” de la Universidad de Antioquia y del Ministerio de Salud. La “bolsa de aire” se formo en todos los especímenes, encontrándose permeable, revestida por varias hileras de células simulando el revestimiento articular y a su alrededor se encontraron macrófagos, linfocitos y polimorfonucleares. Sin embargo, no se logro el establecimiento de la infección en los animales en estudio, debido posiblemente a varios factores entre los cuales se puede mencionar la patogenicidad de la cepa del parásito utilizado, la vía y sitio de inoculación y la respuesta inmunologica del Hámster.Palabras clave: Bolsa de aire, diestrés, dosis infectiva, Leishmania panamensis, reactivo biológico.

Resumen La evaluación de sustancias con actividad Leishmanicida in vivo, actualmente se realiza en modelos animales (ratones o hámster), previo aislamiento y cultivo de los parásitos de Leishmania ssp. y su posterior inoculación y producción de infección en el animal. En este estudio se adaptó la técnica de «Bolsa de aire» descrita por Edwars y colaboradores en 1981, inoculando promastigotes de Leishmania Viannia panamensis (cepa MHOM/CO/87/UA140) vía subcutánea en el espacio interescapular en hámster dorados (Mesocricetus auratus) machos, con el fin de estandarizar un método adecuado para la evaluación in vivo de la actividad leishmanicida de sustancias de origen natural, sintético o hemisintético. En los días 30, 60 y 90 post-inoculación, a cada reactivo biológico se le realizó frotis y aspirado para cultivo en medio NNN para determinar la presencia de infección; en el día 90 a los animales se les aplico la eutanasia, y se tomaron biopsias del sitio de inoculación. Las muestras se procesaron y colorearon con los métodos de Hematoxilina - Eosina y Giemsa. Los aspectos éticos relacionados con el manejo y cuidado de los hámster contaron con la aprobación del "Comité de Ética de Animales de Experimentación" de la Universidad de Antioquia y del Ministerio de Salud. La "bolsa de aire" se formo en todos los especímenes, encontrándose permeable, revestida por varias hileras de células simulando el revestimiento articular y a su alrededor se encontraron macrófagos, linfocitos y polimorfonucleares. Sin embargo, no se logro el establecimiento de la infección en los animales en estudio, debido posiblemente a varios factores entre los cuales se puede mencionar la patogenicidad de la cepa del parásito utilizado, la vía y sitio de inoculación y la respuesta inmunológica del Hámster. Palabras clave: bolsa de aire, diestrés, dosis infectiva, Leishmania panamensis, reactivo biológico. Summary Currently, the in vivo evaluation of Leishmanicide substances is performed in animal models (mice, hamsters) to induce infection, the isolation and culture of Leishmania spp. is previously done, in order to inoculate promastigotes in a stationary phase of growth between the shoulders, subscutaneouly, to make an airpouch. In this research the objective was to standarization the best method to evaluate the activity of natural, synthetic or hemi-synthetic substances against a strain of Leishmania Viannia panamensis MHOM/CO/87/UA140 in 60 gold Hamsters (Mesocricetus auratus). A smear was done from the air pouch during days 30, 60 and 90 postinfection of each hamster and then cultured on NNN media, to determine the presence of infection. At day 90 the hamsters were submmited to euthanasia and new smears were taken. A sample of each air pouch was obtained to then be processed by histopathology. Hematoloxiline and Eosine and Giemsa stains were used. The air pouch were found well established and in all cases was permeable, and internally covered for several cell layers like articular membranes. There were macrophages, polymorphonuclear cells and monocytes, surrounding it. The infection could not be observed in this study in spite of there was an establishment of a well done air pouch in gold hamsters and the high load of parasites; several reasons could be involved: the Leishmania Viannia panamensis strain pathogenic, the area of subcutaneous route of infection, the immunity and phagolisosomal response. The methodology of handle and experimentation with the animals were approved for the Bioethics Committee of Antioquia University and the Health Ministry. Key words: air pouch, biologic reagent, distress, infective dose, Leishmania pananmensis.